如何制作PDA培养基？

怎样制作PDA培养基

PDA培养基，全称马铃薯葡萄糖琼脂培养基（Potato Dextrose Agar Medium），是一种常用的培养基，特别适用于酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌的培养。它的优点包括宜于微生物生长发育、节省原料等。本文将详细介绍如何制作PDA培养基。

一、准备工作

1. 准备基本物品：

试管

棉塞（或泡沫塑料塞、试管帽等）

烧杯

玻璃棒

移液管（可选，带胶帽）

漏斗（可选，三角漏斗）

记号笔

线绳或橡皮筋

牛皮纸

高压蒸汽灭菌锅

2. 准备配方材料：

去皮马铃薯：200克

葡萄糖：20克

琼脂：15~20克（质量好的琼脂15克即可，质量差的应适当增加，夏天时也可适当增加）

蒸馏水或自来水：1000毫升

二、制作步骤

1. 称量材料：

使用电子天平称取去皮马铃薯、葡萄糖和琼脂。注意琼脂的用量可以根据其质量和气温调整。

2. 马铃薯处理：

将马铃薯洗净并去皮，切成小块。

将切好的马铃薯放入锅中，加入1000毫升的水。

3. 熬煮马铃薯：

在加热器上将锅加热至沸腾，维持20~30分钟，直到马铃薯能被玻璃棒戳破为止。

用纱布（2~8层均可，具体根据过滤效果选择）趁热过滤掉马铃薯残渣，滤液留在锅中。

如果滤液少于1000毫升，则补充水分至1000毫升。

4. 加热溶解：

将滤液放入锅中，加入琼脂，放在石棉网上小火加热，并不断用玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底或溢出。

待琼脂完全溶解后，加入葡萄糖，继续搅拌均匀。

如果在加热过程中水分有损失，可以适当补充水分至1000毫升。

5. 分装：

根据不同的实验目的，将配制好的培养基分装到试管或500毫升的三角瓶内。

分装时，可以使用漏斗，以避免培养基沾在管口或瓶口上造成污染。

分装量：

固体培养基：约为试管高度的1/5，灭菌后制成斜面。

三角瓶：以不超过其容积的一半为宜。

半固体培养基：以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。

6. 加棉塞：

在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以防止外界微生物进入培养基内造成污染，同时保证有良好的通气性能。

棉塞要用未脱脂的经弹松的棉花，棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发。

7. 包扎：

加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好。

在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好。

用记号笔注明培养基名称、配制日期、组别、制作人等信息。

8. 灭菌：

将包扎好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌。

在121℃、0.103MPa（105kPa）压力下灭菌15~30分钟。如果没有高压蒸汽灭菌锅，也可以用家用高压锅上汽后灭菌1小时。

9. 无菌检查（可选）：

将灭菌后的培养基冷却后，放入25℃恒温培养箱内培养48小时。

若培养基上无杂菌生长，则可以低温保存备用。

三、其他事项

1. 培养基的pH调节：

PDA培养基一般不需要调pH，其pH值自然。

如果需要调节pH，可以用pH试纸测定其pH，然后用1mol/L的NaOH或HCl溶液进行调节。调节时应逐滴加入，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。

2. 液体培养基的制作：

如果需要制作不含琼脂的液体培养基，可以省略琼脂的加入，直接用于菌类的震荡培养。

3. 抗生素的加入（可选）：

为了抑制细菌的生长，减少干扰性，可以在培养基中加入氯霉素或土霉素，加入量为0.2克/升培养基。

4. 培养基的保存：

灭菌后的培养基应存放在低温、干燥、避光的环境中，以防止其变质。

四、棉塞的制作与注意事项

1. 棉塞的作用：

防止杂菌污染。

过滤空气，保证通气良好。

减缓培养基水分的蒸发。

2. 棉塞的制备：

正确的棉塞应形状、大小、松紧与试管口（或三角烧瓶）完全适合。

过紧会妨碍空气流通，操作不便；过松则空气会毫无障碍地进入试管（或三角烧瓶）中，达不到灭菌的目的。

棉塞头较大，加塞时，应使棉塞长度的1/3留在试管口外，2/3在试管口内。

3. 替代材料：

有条件的实验室可以使用坚固的塑料试管帽、金属试管帽、硅胶泡沫塞等替代棉塞。

通过以上步骤，你就可以制作出优质的PDA培养基了。这种培养基不仅简单易行，而且成本低廉，非常适合微生物学、植物病理学等领域的实验和研究。希望这篇文章能对你有所帮助，祝你实验顺利！