如何制作石蜡切片并附有图解的步骤是什么？

石蜡切片的制作步骤

石蜡切片术是组织学中最常用的技术之一，它通过将组织样本固定、脱水、包埋、切片和染色，最终制成可以在显微镜下观察的玻片标本。以下是石蜡切片的详细制作步骤，由于无法直接提供图片，每一步骤将尽量详细描述，以便读者能够理解和操作。

一、取材与固定

1. 取材

目的：选择并获取需要观察的人体或动物组织样本。

步骤：

确定所取材料的来源及部位，决定是纵切还是横切。

取材要迅速，防止组织发生进一步变化。

材料体积要适宜，不宜过大或过小。

注意事项：

对于植物组织，最常用的固定液为FAA（万用固定液），配方为50%或70%酒精90ml、冰醋酸5ml、福尔马林5ml（柔软材料用50%酒精，坚硬材料用70%酒精配制）。

对于动物组织，常用10%甲醛液作为固定液。

2. 固定

目的：使组织尽可能保持活体时的结构状态。

步骤：

将切取的组织块立即浸入固定液中。

固定时间根据组织类型和大小而定，短则数小时，长则数月或数年。

注意事项：

固定后的组织应充分水洗，除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。

如果暂时不能进行下一步操作，可将固定后的组织块于70%的酒精溶液或直接与FAA固定液中，于冰箱中4℃存放。

二、脱水与包埋

1. 脱水

目的：脱去组织中的水分，使透明剂能够进入组织。

步骤：

将固定好的组织块依次用70%、85%、95%、100%的乙醇进行逐级脱水，每步1-2小时左右。

注意事项：

保证脱水梯度和每一步脱水时间，水要完全脱净，但也不能过度脱水，否则组织会变脆、收缩。

2. 透明

目的：用透明剂替换出组织内的酒精，使组织呈现透明状态。

步骤：

将脱水后的组织块用二甲苯与酒精的等体积混合液浸渍1小时，然后转入纯二甲苯中浸渍1-2小时，重复一次。

注意事项：

透明剂的浸渍时间要根据组织材料块大小及属于囊腔抑或实质器官而定。

透明时间过短，则透明不彻底，石蜡难于浸入组织；透明时间过长，则组织硬化变脆，不易切出完整切片。

3. 浸蜡与包埋

目的：用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。

步骤：

将透明后的组织块放入熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液中浸渍1-2小时。

然后将组织块移入纯石蜡中浸渍3小时左右，重复两次。

浸蜡应在高于石蜡熔点3℃左右的温箱中进行，以利石蜡浸入组织内。

浸蜡后的组织块放在装有蜡液的容器中（摆好在蜡中的位置），待蜡液表层凝固即迅速放入冷水中冷却，做成含有组织块的蜡块。

注意事项：

石蜡熔化后应在蜡箱内过滤后使用，以免因含杂质而影响切片质量。

包埋的组织块数量多时应进行编号，以免差错。

石蜡熔点可根据季节及操作环境温度来选用，夏季宜采用熔点较高的石蜡（56-58℃），冬季宜选用熔点较低的石蜡（52-54℃）。

三、切片与染色

1. 切片

目的：将包埋好的蜡块切成薄片，便于观察。

步骤：

将包埋好的蜡块用刀片修成规整的梯形或四棱台，粘于小木块上或置于包埋框内。

将蜡块固定在切片机的蜡块钳内，使蜡块切面与切片刀刃平行。

调整切片机的切片厚度，通常在5-10μm范围内。

切片，用毛笔轻托轻放在纸上。

注意事项：

切片刀的锐利与否、蜡块硬度是否适当都直接影响切片质量。

可用热水或冷水等方法适当改变蜡块硬度。

2. 贴片与烤片

目的：将切好的蜡片牢附于载玻片上，防止在后续操作中脱落。

步骤：

在洁净的载玻片上涂抹薄层粘附剂（如蛋白甘油）。

将一定长度的蜡带（连续切片）或用刀片断开成单个蜡片于温水（45℃左右）中展平后，捞至玻片上铺正。

或直接滴两滴蒸馏水于载玻片上，再把蜡片放于水滴上，略加温使蜡片铺展。

用滤纸吸除多余水分，将载玻片放入45℃温箱中干燥，也可在37℃温箱中干燥，但需适当延长时间。

注意事项：

粘附剂要涂抹均匀，避免产生气泡。

3. 脱蜡与水化

目的：使切片能够在水溶性染液中进行染色。

步骤：

用二甲苯脱蜡，再逐级经纯酒精及梯度酒精直至蒸馏水。

注意事项：

脱蜡要彻底，避免影响染色效果。

4. 染色

目的：使细胞组织内的不同结构呈现不同的颜色和足够强的差异，便于观察。

步骤：

常用染色法是苏木精-伊红染色法（HE染色法）。

将切片放入苏木精染液中染色，细胞核被染成紫蓝色。

然后用伊红染液染色，多数细胞质及非细胞成分被染成粉红色。

染色时间根据组织类型和切片厚度而定。

注意事项：

染色剂需特定厂家生产的产品。

掌握适宜的染色时间，才能达到较好的染色效果。

四、封固

1. 封片

目的：将切片制成永久性玻片标本，便于长期保存和观察。

步骤：

在切片上滴加适量（1-2滴）中性树胶。

将洁净盖玻片倾斜放下，以免出现气泡。

封片后即制成永久性玻片标本。

注意事项：

封固剂可选择加拿大树胶或中性树胶。

封片时要避免产生气泡，影响观察效果。

2. 贴标签与保存

目的：对切片进行标识和保存，便于以后查阅和使用。

步骤：

在玻片的一角贴上标签，标明切片信息（如组织类型、切片日期等）。

将切片放入切片盒中，置于干燥、阴凉处保存。

通过以上步骤，一个完整的石蜡切片就制作完成了。虽然石蜡制片程序及环节繁多，但切片可长期保存，供教学、科研及病理诊断及复察使用，具有重要的应用价值。